抗A型肉毒毒素人源单链抗体的表达、纯化及结合活性分析

摘要：

目的:实现特异性抗A型肉毒毒素人源单链抗体(ScFv)的表达与纯化,并进行结合活性分析.方法:克隆单链抗体基因ScFv(VH-Linker-Vk),利用pET22b表达载体构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG化学诱导,固相亲和层析纯化蛋白,ELISA测定其特异结合活性.结果:pET22b可稳定表达人源单链抗体基因,表达产物占全菌蛋白的25%,表达蛋白全部以包涵体形式存在于胞内.经IMAC纯化,蛋白纯度大于95%.竞争性ELISA测定结果表明,重组抗毒素在体外具有良好的活性,可竞争肉毒马血清与肉毒毒素结合.结论:采用原核表达系统可实现抗A型肉毒毒素人源单链抗体的高效表达,重组人源单链抗体具有抗原特异结合活性.

关键词：A型肉毒毒素、人源单链抗体、表达、纯化、大肠杆菌

所属期刊栏目：28

分类号：R392.11

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2002CB513205

在线出版日期：2004-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：414-416