Acrp30基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的:克隆人Acrp30基因,并在大肠杆菌中表达.方法:提取人脂肪组织总RNA,经RT-PCR扩增目的cDNA片段,进行核苷酸序列分析;将该基因克隆入原核表达载体pQE-30,在大肠杆菌M15中表达,用Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化重组蛋白;并用Western印迹检测所制备多克隆抗体的特异性.结果:从人脂肪组织总RNA中扩增得到736 bp的目的cDNA,其序列与已报道的序列完全一致,并在大肠杆菌中成功获得高水平表达,蛋白相对分子质量大约为30×103,其表达量占菌体总蛋白的15%左右.重组蛋白经Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化,纯度>90%.Western印迹试验证实所制备多克隆抗体具有较高特异性.结论:本研究为进一步探讨Acrp30在肥胖症和糖尿病患者中的表达情况以及Acrp30的作用机制奠定基础.

关键词：Acrp30、碱基序列、印迹法、蛋白质、大肠杆菌、基因表达

所属期刊栏目：27

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：13-15,18