炭疽芽孢杆菌防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术的研究

摘要：

目的:建立防污染PCR-微孔板杂交-EIA检测技术,并用于炭疽芽孢杆菌芽孢的检测.方法:根据炭疽芽孢杆菌毒力相关基因设计引物,筛选合适引物,建立用UDG酶防污染的PCR扩增-微孔板杂交与酶联显色检测炭疽芽孢杆菌的方法,并探讨试剂的室温稳定系统,将建立的方法用于模拟污染炭疽芽孢土壤样品的检测.结果:根据炭疽芽孢杆菌荚膜和水肿因子基因设计的引物,可以同时检测两个毒力相关质粒的存在,用0.1?U的UDG可以防止1010产物的污染,微孔板杂交-酶联显色检测比单纯PCR-电泳敏感10倍.加入稳定剂的PCR-微孔板杂交-EIA体系可以耐受7?d的37℃破坏试验.将该体系用于污染土壤的检测,可以检测出0.25?g土壤中103个炭疽芽孢的存在.结论:所研制的防污染PCR-微孔板杂交-EIA试剂克服了目前PCR试剂运输不便,产物污染所致假阳性和判定结果欠客观的缺点,为炭疽芽孢的快速检测提供了有力手段.

关键词：PCR、炭疽芽孢杆菌、芽孢、检测、微孔板杂交、防污染

所属期刊栏目：26

分类号：R378.72(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-8