胶质源性神经营养因子在人外周血白细胞中的表达

摘要：

胶质源性神经营养因子（GDNF）因最初在大鼠胶质细胞系B49细胞中发现而得名。GDNF显著的生物学功能是能促进多种神经元细胞的生长和分化，包括多巴胺能神经元、外周自主性神经元亚群和感觉神经元，中枢神经系统的运动神经元，去甲肾上腺素能神经元等。GDNF的组织分布比较广泛，在发育个体的脑组织包括海马、脑皮层和中脑及外周组织的皮肤、肾脏、胃、精囊、骨骼肌、卵巢、肺、肾上腺有一定程度的表达，在心脏、脾、胸腺、甲状腺、垂体和唾液腺检测到极低水平的GDNF mRNA。成年动物中，GDNF在小肠中的表达水平上升，而在其他组织中则逐渐下降，说明GDNF除对神经系统有作用外，对其他器官组织也有一定的作用。
目前所发现的许多神经营养因子如神经生长因子(NGF)、脑衍生神经营养因子(BDNF)等除对神经元细胞具有广泛的神经营养作用外，它们还具有比较广泛的生物学作用。目前对GDNF功能的研究仍集中在对神经元细胞作用方面。为了进一步探讨GDNF其他可能的生物学功能，本实验用RT-PCR方法初步探讨了GDNF在外周血白细胞、人脐血白细胞及人髓系白血病细胞系KG-1a中的表达。
实验中分别选用人外周血及人脐带血，从中分离白细胞，同时选用人髓系白血病细胞系KG-1a，分别提取3种来源细胞的总RNA，对提取的细胞总RNA用DNA酶消化，以确保样品中无基因组DNA污染。根据文献报道的GDNF cDNA序列设计如下引物：
（1） 5′-AAATGTCACCAGATAAACAA-3′；
（2） 5′-CGGGATCCTTAGATACATCCACACCT-3′。
以从3种细胞中提取的总RNA为模板，进行RT-PCR反应，同时，依据已知GDNFR-α的cDNA序列设计如下引物：
A：5′-TCTAAAGGAAAACTACGC-3′；B：5′-CGGGATCCTGTGGTTATGTGGCTGGA-3′。检测KG-1a细胞对GDNF受体GDNFR-α的表达，并以MTT法初步探讨了外源性rhGDNF对KG-1a细胞生长的影响。
实验结果表明，在人外周血白细胞及人髓系白血病细胞KG-1a中检测到GDNF在mRNA水平上的表达，而人脐血白细胞则未见到GDNF在mRNA水平上的表达。由于本实验没有对外周血白细胞进行进一步的分离，具体何种细胞表达GDNF还不清楚。另外有文献报道，人髓系白血病细胞KG-1a表达GDNF受体成员的两个组分GDNFR-α和Ret，本实验又发现此细胞在mRNA水平上有GDNF的表达，因此推测GDNF对此细胞有一定的生物学作用，但是以本实验所采用的MTT法，没有观察到rhGDNF对KG-1a细胞有明显的促增殖或抑制生长的作用。究竟GDNF在 KG-1a细胞和人外周血白细胞中表达的意义何在，还需进一步的实验研究。

关键词：胶质源性神经营养因子、基因表达、人外周血白细胞

所属期刊栏目：25

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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