ENA抗体检测方法的优化改进

摘要：

可提取性核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)是一组可以溶解于盐水的细胞核抗原的总称。检测ENA抗体有助于对多种自身免疫性疾病的诊断，也可以对这些疾病的治疗效果进行评价。目前ENA抗体检测主要是采用免疫印迹法，该方法灵敏度较高、特异性好，但影响因素较多，实验条件掌握不好容易出现假阳性或假阴性。我们采用万孚生物技术有限公司的ENA抗体检测试剂盒对我院的256例疑为自身免疫性疾病的患者进行了检测，并对方法中的某些步骤进行了改进。在试剂盒方法中，洗涤液加0.5 ml于反应槽，待检血清加1 μl。我们认为洗涤液加1.0 ml、待检血清加20 μl更为合适。因为这样既不影响血清的作用浓度，又降低了37℃环境下液体蒸发对抗原-抗体反应的影响。因为缓冲液浓度增高容易加深背景显色和非特异显色区带增多。在我们对30例患者的检测中，改进方法较原方法具有更好的特异性和清晰的本底。另外，当试剂盒接近于失效期时，实验的反应时间和显色时间应适当延长，显色温度可由原来的室温改为37℃。如此，可以明显地提高实验的敏感性，避免假阴性结果的出现。我们对一例系统性红斑狼疮(SLE)患者同时利用两种方法检测，条膜采用的是上一次（7 d前）打开剩下的条膜。结果常规的试剂盒方法检测到抗U1RNP抗体（Mr 28×103/70×103），而优化改进方法（抗原-抗体反应时间由原来30 min延长60 min，显色温度由室温变为37℃）除检测到抗U1RNP抗体外，还检测到了另一抗rRNP抗体（Mr 38×103）。

关键词：可提取性核抗原、免疫印迹法、自身免疫疾病

所属期刊栏目：25

分类号：R392.11

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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