高效液相色谱法同时测定全血中的原卟啉和锌原卟啉

摘要：

目的 建立可同时测定全血中原卟啉和锌原卟啉的高效液相色谱-荧光检测法.方法 优化流动相、色谱柱、样品处理方法等,确定最佳参数.采用荧光检测器扫描选取最佳激发和发射波长.以保留时间定性,外标法定量,绘制标准工作曲线.计算方法的检出限、定量限、准确度、精密度、重复性和重现性.结果 经优化,取血样30μl,加入170 μl纯净水稀释,经涡旋混合器混匀,加入1.0 ml甲醇,涡旋混匀沉淀蛋白,于涡旋振荡器上混匀5 min,超声提取20 min,15 289 xg离心5 min,吸取上清液,50 μl上机测定.采用反相键合固定相色谱柱Thermo AcclaimTM 120 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm 120?)分离,50 mmol/L乙酸铵水溶液(pH=6.0)和甲醇等度洗脱,原叱啉和锌原卟啉最适的激发/发射波长分别为396 nm/625 nm、411 nm/581 nm.原卟啉和锌原卟啉在1.0～50 μg/L浓度范围内线性均良好(r值均＞0.999);检出限均为12 μg/L,定量限均为40 μg/L;以抗凝牛全血为基质,在低、中、高3个浓度进行加标,回收率为78.2％～85.6％,相对标准偏差(RSD)为1.3％～4.2％,日间RSD为1.3％～5.5％.对12份样本进行测定,原叱啉和锌原卟啉含量分别为75～154 μg/L和305～373 μg/L,均低于慢性铅中毒标准.结论 成功建立简单、快速可同时测定全血中原卟啉和锌原卟啉的高效液相色谱-荧光检测法,能够用于日常抗凝全血中的原卟啉和锌原卟啉含量测定.

关键词：高效液相色谱法、抗凝全血、原卟啉、锌原卟啉

所属期刊栏目：33

分类号：R113(卫生基础科学)

资助基金：江苏省卫生与健康医学科研项目Y2018080

在线出版日期：2022-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：272-276