A型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

摘要：

为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法.利用建立的RT-LAMP检测方法对口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒与塞内卡病毒进行特异性试验.将SVA VP1质粒10倍梯度稀释液作为模板(1×100～1×107拷贝)进行RT-LAMP和RT-PCR反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性.采集疑似发病猪的鼻腔拭子和水疱液共126份样品,应用RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化鉴定.结果表明,与传统RT-PCR相比,RT-LAMP检测方法灵敏度高1000倍,且与其他病毒无交叉反应,具有高度敏感性和特异性.临床样品检测结果显示,鼻腔拭子样本SVA阳性率为29.6％,水疱液样本SVA阳性率为100.0％,2种方法检测结果一致,符合率为100％.综上所述,本研究建立的RT-LAMP检测方法准确、简便、经济有效,尤其适用于现场和基层实验室对SVA的快速诊断.

关键词：A型塞内卡病毒、RT-LAMP、快速检测

所属期刊栏目：35

分类号：Q939.4(微生物学)

资助基金：四川省科技支撑计划项目2015NZ0072;"十三五"育种攻关计划课题2016NY20052

在线出版日期：2019-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：868-873