番鸭呼肠孤病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立

摘要：

为实现番鸭呼肠孤病毒的快速检测,本研究根据GenBank中公布的番鸭呼肠孤病毒σC蛋白基因的高度保守序列设计了4条引物,通过优化反应体系中各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法.然后以鸭常见病毒基因组为模板,开展特异性检测,最后通过添加SYBR Green I荧光染料完成可视化LAMP检测方法的建立.结果显示:25μl LAMP反应体系,镁离子5×10-5 mmol,dNTP 1.25×10-5 mmol,Bst DNA聚合酶8 U,F3/B35×10-6μmol,FIP/BIP 3×10-5μmol,62℃,45 min为最优反应条件;在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显;对临床样品的阳性检出率与常规RT-PCR检测方法一致,但灵敏度高于PCR方法,最低检测限为10 pg,检测结果可直接通过肉眼观察来判断.该方法为番鸭呼肠孤病毒的可视化RT-LAMP快速检测试剂盒研制奠定了基础.

关键词：番鸭呼肠孤病毒、环介导等温扩增、可视化、快速检测

所属期刊栏目：33

分类号：S851.34+7.201(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏省教育厅自然科学基金面上项目16KJB230004;江苏省"六大人才"高峰第十二批培养对象资助项目NY023;江苏省大学生创新创业训练计划校企合作基金;安徽省科技攻关项目1201c0602006;泰州市科技支撑计划农业项目TN201703;江苏省高校优秀科技创新团队资助项目2050305-44

在线出版日期：2018-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1321-1326