磁珠筛选抗Cry2 Aa人源化单链抗体及检测方法的建立

摘要：

为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(scFv).通过4轮"扩增-吸附-洗脱",从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定.选取相对结合活性最好的阳性克隆建立间接竞争ELISA,确定其检测范围.筛选后第4轮相对产出率较第1轮提高了4.07×106倍;单克隆ELISA鉴定出8个含有完整外源基因片段的阳性克隆,测序后获得3个不同序列的阳性克隆.D5克隆的噬菌体上清对Cry2Aa的检测灵敏度(IC10)为6.632 ng/ml,线性范围为0.016～2.881μg/ml.该克隆对Cry2Aa具有良好的特异性和板内板间重现性.

关键词：Cry2Aa毒素、单链抗体、磁珠、间接竞争ELISA

所属期刊栏目：33

分类号：X836(环境监测)

资助基金：国家自然科学基金项目3111343、31201535;江苏省自然科学基金青年基金项目BK20150114;江苏省高校自然科学研究项目14KJB210004;金陵科技学院博士启动项目jit-6-201518

在线出版日期：2017-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：945-950