藏猪β-防御素2基因克隆及原核表达载体的构建

摘要：

为了构建藏猪β-防御素2(pBD-2)成熟肽原核表达载体,从藏猪肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR获取pBD-2目的基因,并与pMD19-T载体连接构建重组质粒,命名为pMD19T-pBD-2;以pMD19T-pBD-2质粒为模板,克隆pBD-2成熟肽cDNA序列并构建成熟肽pET-32a-pBD-2表达质粒.结果显示,藏猪pBD-2基因全长为298 bp,与野猪和家猪的pBD-2基因同源性分别达100.0％和98.9％;藏猪pBD-2基因具有1个完整的开放阅读框,编码69个氨基酸组成的多肽,包含21个氨基酸残基的信号肽、11个氨基酸残基的前导肽和37个氨基酸残基的成熟肽;编码的pBD-2成熟肽稳定性较好,分子量4085.78,等电点8.89,具有6个半胱氨酸(Cys)残基,7个带正电荷和2个带负电荷的氨基酸残基,为亲脂性和亲水性多肽;从pMD19T-pBD-2质粒中亚克隆得到长度为114 bp藏猪pBD-2成熟肽cDNA序列,菌落PCR、酶切和测序鉴定证明成功构建了成熟肽pET-32a-pBD-2原核表达质粒.

关键词：藏猪、β-防御素2、克隆、原核表达载体

所属期刊栏目：33

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省高等学校科技创新团队资助项目KM406183.1;四川农业大学学科双支计划项目03570434

在线出版日期：2017-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：848-853