人溶菌酶重组酵母工程菌的构建和活性干粉的制备

摘要：

本试验旨在构建一种胞内表达人溶菌酶的新型酵母工程菌，并利用其高蛋白、富含溶菌酶的特点开发新型动物饲料添加剂，避免直接使用人溶菌酶制剂带来的高成本、活性不稳定等问题。将来自胎盘的人溶菌酶hLYZ基因克隆至表达载体pPICZA上，验证后的重组载体电转化至X?33毕赤酵母中，经标准培养基BMGY／BMMY培养、甲醇诱导表达后，检测蛋白表达活力和人溶菌酶活力。在此基础上，以麦芽汁?蚕蛹为培养基，通过单因素试验和正交试验来优化培养基成分和摇瓶发酵条件。结果表明，人溶菌酶基因在重组酵母工程菌中成功表达且酶活力为1920 U。以麦芽汁和蚕蛹浸提物为碳氮源，测得蚕蛹浸提物占40％并且营养盐含量为170μg／ml时最适合菌体生长。正交试验测得R值的大小为：生长阶段pH值＞诱导阶段甲醇含量＞接种量，最佳摇瓶发酵条件是生长阶段pH值为6，诱导阶段甲醇添加量为1％，接种量为3％。经发酵培养的新型酵母工程菌利用真空冷冻干燥技术制成干粉，活菌数为1 ml 1×109个，溶菌酶活性为1320 U。上述研究结果为新型饲料添加剂的开发和利用奠定了基础。

关键词：人溶菌酶、毕赤酵母、胞内表达、培养条件、活性酵母干粉

所属期刊栏目：32

分类号：S816.4(普通畜牧学)

资助基金：江苏省科技支撑计划项目 BE2013428；江苏省自然科学青年基金项目 BK20130672；南京农业大学青年科技创新基金项目KJ2013030

在线出版日期：2016-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1122-1127