一步法 SYBR Green 实时定量 RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立

摘要：

为建立快速检测坦布苏病毒( Tembusu virus,TMUV)的一步法SYBR Green实时定量RT-PCR方法,本研究根据TMUV NS2A基因的保守序列,设计并合成了1对特异性引物,以体外转录的NS2A基因作为标准品,采用一步法实时定量RT-PCR方法检测TMUV。结果显示该方法标准曲线的决定系数为0.997,具有良好的线性关系；灵敏度为1μl 10拷贝,是常规RT-PCR方法的100倍；并且与其他病毒无交叉反应,批内和批间变异系数分别为0.11%~0.30%和0.88%~1.31%,具有良好的特异性和稳定性。该方法对于TMUV人工感染鸭泄殖腔棉拭子的检测阳性率为100%,而常规RT-PCR检测的阳性率只有71%。因此,本研究所建立的一步法实时定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性、特异性好,可以用于TMUV的临床检测。

关键词：坦布苏病毒、实时定量RT-PCR、NS2A基因

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31172345;江苏省农业科技自主创新基金项目CX142091

在线出版日期：2015-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：829-833