不同启动子在水稻悬浮细胞中诱导外源基因的表达

摘要：

为进一步提高外源基因在水稻悬浮细胞中的表达水平,以花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子为对照,克隆了玉米泛素蛋白启动子( Ubi)、水稻肌动蛋白启动子( Actin)以及水稻Oscc1启动子,以GFP为报告基因,通过启动子串联的方式,构建了10个植物表达载体：pCAMBIA 130435S-GFP、Ubi-GFP、Actin-GFP、Oscc1-GFP、35S/Ubi-GFP、35S/Actin-GFP、35S/Oscc1-GFP、Ubi/Actin-GFP、Ubi/Oscc1-GFP、Actin /Oscc1-GFP,采用根瘤农杆菌介导的方法,将表达载体导入日本晴胚性愈伤,经悬浮培养分别获得转基因的悬浮细胞系,利用荧光显微镜、酶标仪检测GFP荧光强度,用Western b1ot检测GFP蛋白质的表达水平。结果发现串联启动子明显强于单个启动子驱动的GFP蛋白质表达水平。在10个表达载体中,35S/Ubi、Ubi/Actin和Ubi/Oscc1是3种优化的启动子组合,其中Ubi/Oscc1串联启动子驱动GFP的表达水平最高,约为对照35S启动子的3倍。

关键词：串联启动子、水稻、悬浮细胞系、绿色荧光蛋白、异源表达

分类号：S511.035.3(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金项目31171326

在线出版日期：2015-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1208-1215