稳定表达猪CYP3 A29基因的PAM细胞系构建及鉴定

摘要：

为获得稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系,利用RT-PCR方法获取猪CYP3A29基因序列后与克隆载体PMD18-T相连,得到PMD18-T-CYP3A29重组质粒并测序验证,利用Xho I和Not I双酶切重组质粒及pcDNA3.1(+)/zeo,回收后连接,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/zeo-CYP3A29,双酶切及测序验证其正确性,并以脂质体2000将其转染至猪肺泡巨噬细胞系3D4/21,经Zeocin抗性筛选,借助RT-PCR及Wesrern-blot鉴定该基因的表达情况。结果表明,成功获得表达CYP3A29的细胞株,且连续培养10代后,RT-PCR及Wesrern-blot仍能检测到该基因表达。说明,稳定表达CYP3A29基因的猪肺泡巨噬细胞系构建成功,该细胞系的成功构建为进一步研究分析猪CYP3A29基因的功能提供了可能。

关键词：猪、CYP3A29、肺泡巨噬细胞、稳定表达细胞系

分类号：S831.2(家禽)

资助基金：国家自然科学基金项目31301953;国家生猪现代产业技术体系项目nycytx-009;江苏省自然科学基金项目BK20131332;江苏省农业科技自主创新基金项目CX 132037

在线出版日期：2014-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：554-559