经密码子优化的耐热纤维素酶在大肠杆菌中的表达

摘要：

为了提高质粒pHsh-celD在大肠杆菌中的表达量,运用 mRNA 二级结构预测软件对pHsh-celD翻译起始区的二级结构进行优化,得到了具有最佳 mRNA二级结构及自由能的质粒pHsh-celD I。为了进一步提高纤维素酶的表达量,在不改变目的基因翻译的氨基酸序列的前提下,celD的N-端氨基酸尽可能地使用大肠杆菌同义密码子,定点突变后得到质粒pHsh-celD II。优化后质粒pHsh-celD II表达的纤维素酶活[(6.4±0.4) U/ml]是未优化[(4.1±0.3) U/ml]的1.6倍。 SDS-PAGE 结果显示,该重组酶的分子量为66000,与理论值相符。基于热激载体pHsh 的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。

关键词：纤维素酶、mRNA 二级结构、优化、热激载体

分类号：S634.3(蔬菜园艺)

资助基金：泰安市科技发展计划项目20132094;泰山学院博士科研启动基金项目Y-01-2013001

在线出版日期：2014-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：497-502