猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立与应用

摘要：

为定量检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),建立了检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法.根据PEDV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应.结果表明,该试验建立的荧光定量PCR方法在lμl 101 ～ 109拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.99以上,扩增效率在90％与100％之间.该方法的检测灵敏度为10拷贝,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高,而且该检测方法特异性较好,与猪的其他病毒核酸均无交叉反应,批内和批间的变异系数均低于3％,表明该方法的重复性较好.对华东地区采集的130份临床样品进行检测,结果显示,PEDV的阳性率为63.1％.

关键词：猪流行性腹泻病毒、TaqMan荧光定量PCR、流行病学调查

所属期刊栏目：30

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏省农业科技自主创新基金项目CX133069

在线出版日期：2014-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：125-129