甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA干扰载体的构建

摘要：

采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)基因.为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK基因长498 bp的siRNA靶序列,连接到pEASY-T1载体上,采用NotⅠ和Xho Ⅰ酶切,酶切产物连接到RNAi平台载体pHurricane的NotⅠ和Xho Ⅰ位点,通过多重PCR鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK基因反向重复框克隆到加入napin启动子的pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体.限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础.

关键词：甘蓝型油菜、丙酮酸激酶、RNA干扰、载体构建

所属期刊栏目：29

分类号：S565.4(经济作物)

资助基金：江苏省自然科学基金项目BK2011668;江苏省农业科技自主创新基金项目CX10406;农业部油料作物生物学重点开放实验室开放课题201001;国家"948"项目2011-G23

在线出版日期：2013-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：20-27