稳定表达CD163蛋白的猪肺泡巨噬细胞系的建立

摘要：

以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性.使用脂质体2000将pcDNA4.0-CD163转染猪肺泡巨噬细胞系3D4/21(CRL-2843),通过Zeocin抗性筛选,建立稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系.RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)检测结果表明CD163在mRNA和蛋白质水平均已表达.通过Zeocin抗性筛选,共获得8株表达CD163的重组细胞株,IFA检测结果表明表达的CD163定位于重组细胞的细胞膜表面.去除筛选抗性后连续传代10代,间接免疫荧光检测结果确定重组细胞株在10代内性状稳定,说明稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系构建成功.

关键词：CD163、猪肺泡巨噬细胞、重组细胞系

所属期刊栏目：28

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划"863"计划项目2011AA10A213;江苏省农业自主创新基金项目CX094065、CX102049

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：565-570