SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定

摘要：

构建了以睡美人( Sleeping beauty,SB)转座子为载体元件、β-乳球蛋白质(β-lactoglobulin,BLG)为调控区的人乳铁蛋白质(Human lactoferrin,hLF)乳腺表达载体及增强型绿色荧光蛋白质(EGFP)表达载体,便于验证SB转座子的转座效率,为hLF乳腺表达载体成功转染乳腺上皮细胞(GMC)奠定基础.采用PCR法从绵羊基因组中扩增5′、3′BLG,经TA克隆,在中间载体pcDNA3.1(-)的作用下,与hLF连接,得到pcDNA3.1(-)-BLG-hLF,然后与pT2连接,构建pT2-BLG-hLF；此外,还构建了pT2-BLG-EGFP.采用测序、酶切、PCR 3种方法鉴定阳性克隆,并用脂质体法将pT2-BLG-EGFP转染至GMC细胞中进行观察.分子鉴定结果:5′BLG、3′BLG克隆成功,pT2-BIG-hLF及pT2-BLG-EGFP构建正确；细胞鉴定结果:SB转座子介导的EGFP能在GMC细胞中高效表达.成功克隆了5′BLG、3′BLG调控区,并成功构建了乳腺表达载体pT2-BLG-hLF.

关键词：“睡美人”(SB)转座子、β-乳球蛋白、乳腺表达载体、乳腺上皮细胞

所属期刊栏目：27

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：高产优质转基因奶羊新品种培育项目2008ZXD8008004

在线出版日期：2012-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：795-801