一种快速微量化测定蛋白质谷氨酰胺酶活性的方法及其初筛应用

摘要：

通过对苯酚-次氯酸盐法(试管体系)反应体系微量化,借助酶标仪动态检测96孔板中蛋白质谷氨酰胺酶与底物产生氨的最大速度Δmaxv,对于不同浓度的标准PG样品与不同酶活的发酵液,Δmaxv与酶活间呈显著正相关(r=0.999、r=0.890),故用Δmaxv代替酶活进行快速测定.选用96孔板作为快速测量体系,标准PG样品与发酵液在96孔板内部60孔中Δmaxv变异系数分别为10%、18%.利用该方法进行亚硝酸钠(nitrite,NIT)诱变初筛,0.6 mg/mL 的NIT处理109 CFU/mL菌液20 min,涂板后筛选400株菌株样本,利用该方法最终得到1株是出发菌株酶活1.825倍且稳定性良好的菌株,可继续作为出发菌株应用于后续诱变筛选工作中.该方法可以准确、快速地提高诱变初筛的效率,为以后的育种工作奠定了基础.

关键词：苯酚-次氯酸盐法、快速微量化、Δmaxv、蛋白质谷氨酰胺酶

所属期刊栏目：45

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金31170920;大夏大学生科研基金项目2014DX-333

在线出版日期：2017-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：153-157