野油菜黄单胞菌葡萄糖激酶基因的克隆与表达

摘要：

葡萄糖激酶催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸,是糖酵解的第一步反应,在野油菜黄单胞菌(Xcc)利用碳源代谢及其致病性中起重要作用.为了初步鉴定Xcc葡萄糖激酶基因功能,为研究其利用碳源相关代谢及致病性提供理论依据,以pQE30为表达载体,采用常规PCR技术对野油菜黄单胞菌Xcc8004基因组上注释为葡萄糖激酶的3个基因(XC_1166、XC_1223和XC_1976)进行了克隆与表达,该3个基因在大肠杆菌JM109中有较高表达量,经Ni2+金属层析柱纯化后分别得到带有3个His的融合蛋白XC_1166-His6、XC_1223-His6和XC_1976-His6,分析表明仅XC_1976的表达产物具有葡萄糖激酶活性,为Xcc8004葡萄糖激酶基因,经测定XC_1976-His6的最适反应温度为45℃,最适pH值为7.1,最适反应条件下比活力为(380.6±1.123) U/mg.

关键词：野油菜黄单胞菌、葡萄糖激酶、克隆、表达

所属期刊栏目：41

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金重点项目30130010;国家自然科学基金面上项目30470944

在线出版日期：2013-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：14-17