LncRNA NEF对成骨细胞和破骨细胞分化及相关蛋白表达的影响

摘要：

目的 探讨长链非编码RNA NEF(LncRNA NEF)在骨质疏松症大鼠中的表达及其对成骨细胞和破骨细胞分化的影响.方法 通过鼠尾悬吊法制备骨质疏松大鼠为实验组(n=6),另设置正常大鼠为对照组(n=6),采用双能X射线骨密度仪与微计算机断层扫描技术测定2组大鼠股骨骨量及结构;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测2组大鼠股骨组织中LncRNA NEF、碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(CTSK)的水平变化.体外培养及诱导分化大鼠前成骨细胞系MC3T3-El细胞、巨噬细胞系RAW264.7细胞.ALP活性检测试剂盒测定成骨细胞ALP活性,茜素红染色、TRAP染色分别观测成骨分化、破骨分化效果.探讨沉默LncRNA NEF表达对MC3T3-El细胞ALP、LncRNA NEF表达、成骨效果的影响,以及对RAW264.7细胞CTSK mRNA及其蛋白表达和破骨效果的影响.结果 实验组大鼠股骨骨密度、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)低于对照组,骨小梁间距(Tb.Sp)高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组大鼠股骨组织中LncRNA NEF、ALP水平低于对照组,TRAP、CTSK水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析显示,在骨质疏松症大鼠中LncRNA NEF与ALP表达呈正相关(r=0.532,P＜0.05),与TRAP、CTSK表达呈负相关(r=-0.624、-0.573,P＜0.05).MC3T3-E1细胞成骨分化过程中,与第0天相比,第15天LncRNA NEF水平、ALP活性上调,差异有统计学意义(P＜0.05);RAW264.7细胞破骨分化过程中,与第0天相比,第6天LncRNA NEF水平下调,CTSK mRNA及其蛋白水平上调,差异有统计学意义(P＜0.05).敲低LncRNA NEF表达可显著抑制MC3T3-El细胞成骨分化,促进RAW264.7细胞破骨分化.结论 LncRNA NEF在成骨分化过程中异常低表达,在破骨分化过程中异常高表达,LncRNA NEF沉默可能通过阻滞成骨细胞分化及促进破骨细胞分化而诱发骨质疏松.

关键词：长链非编码RNA NEF、骨质疏松症、成骨细胞、破骨细胞、分化

所属期刊栏目：26

分类号：R322.7;Q813(人体形态学)

资助基金：广东省医学科学技术研究基金项目;广东省深圳宝安区医疗卫生科研项目

在线出版日期：2022-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：10-15,22