烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

摘要：

目的 探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制.方法 以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用LipofectamineTM2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1 组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染 pcDNA3.1)、ALKBH5-WT 组(转染 pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT 组(转染 pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组.采用比色法检测细胞中 N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50);采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平.结果 与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P＜0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响.与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD450nm值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P＜0.05).在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响.结论 沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性.

关键词：N6-甲基腺苷、烷基化修复蛋白B同源物5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2、阿霉素、P糖蛋白、多药耐药基因1

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分类号：R733.7;R81(肿瘤学)

资助基金：河北省邯郸市科学技术研究与发展计划项目19422083009-24

在线出版日期：2022-06-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：87-92,97