低氧对胰腺癌PANC-1细胞株中TWIST表达的影响

摘要：

目的:探讨低氧条件对胰腺癌PANC-1细胞中TWIST表达的影响及可能的机制.方法:低氧浓度下培养PANC-1细胞,蛋白质印迹检测不同时间点TWIST蛋白的表达水平,免疫荧光检测TWIST、E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白的表达;转染TWIST siRNA后,在常氧及低氧条件下培养,蛋白质印迹检测E-钙黏蛋白,α-SMA和波形蛋白的表达.qRT-PCR及蛋白质印迹检测低氧浓度下PANC-1细胞甲基转移酶样分子3(METTL3)的表达,比色法检测细胞总的N6甲基腺嘌呤(m6A)水平;转染METTL3 siRNA后,在常氧及低氧条件下培养,比色法检测细胞总的m6 A水平.在低氧条件下,转染METTL3 siRNA后,qRT-PCR及蛋白质印迹检测TWIST的mRNA和蛋白表达,MeRIP-qPCR检测TWIST mRNA m6 A水平;转染METTL3野生型和突变型质粒后,蛋白质印迹检测TWIST蛋白的表达.结果:低氧处理胰腺癌细胞,TWIST表达增加,E-钙黏蛋白的表达下降,α-SMA和波形蛋白的表达升高;而同等低氧条件下敲低TWIST表达后E-钙黏蛋白的表达增加,α-SMA和波形蛋白的表达下降.低氧处理后,胰腺癌细胞中METTL3的mRNA和蛋白表达均显著升高,同时细胞总的m6 A水平也显著升高.常氧条件下敲低METTL3表达后胰腺癌细胞总m6 A水平轻度下降,而低氧条件下敲低METTL3则显著抑制细胞总m6 A水平.低氧条件下敲低胰腺癌细胞METTL3表达对TWIST mRNA表达无显著影响,但其显著降低TWIST mRNA的m6 A水平,抑制TWIST蛋白表达;过表达METTL3显著上调TWIST蛋白的表达,而转入METTL3突变质粒未见相关改变.结论:低氧诱导METTL3表达,后者通过m6 A依赖的方式调控TWIST蛋白表达.

关键词：胰腺癌、低氧、TWIST、甲基转移酶样分子3

所属期刊栏目：31

分类号：R730.2;R735.9(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省青年医学人才资助项目

在线出版日期：2021-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：326-332