雷帕霉素靶蛋白复合物1对Hela细胞微管蛋白稳定性的影响

摘要：

目的:探讨雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)对Hela细胞微管稳定性的影响及可能机制.方法:使用50 nmol/L雷帕霉素预处理Hela细胞24 h后,加入5μmol的诺考达唑处理30、60和120 min,免疫荧光检测微管蛋白的稳定性;使用50 nmol/L雷帕霉素处理Hela细胞24 h后,蛋白质印迹检测促微管解聚蛋白stathmin、KIF2A,促微管聚合蛋白CLIP170,微管切割蛋白Katanin、Spastin的表达变化.转染ATG5-shRNA抑制自噬相关基因5(autophagy-related gene5,ATG5)后,免疫荧光检测微管蛋白稳定性的改变.使用50 nmol/L雷帕霉素预处理Hela细胞24 h后,蛋白质印迹检测Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RhoA)的表达;转染GFP RhoA-Q63L或GFP RhoA-N19、p190RhoGAP-siRNA质粒后,免疫荧光检测微管稳定性的改变.结果:用雷帕霉素抑制mTORC1的活性后Hela细胞微管的稳定性增强,但微管稳定性相关蛋白stathmin、KIF2A、CLIP170、Katanin、Spastin无明显变化.抑制细胞自噬后,微管的稳定性无明显改变.雷帕霉素抑制mTORC1的活性后RhoA GTP酶的活化水平下调;下调p190RhoGAP的活化水平后,微管的稳定性减弱.结论:RhoA在mTORC1介导的Hela细胞微管稳定性中起重要作用.

关键词：雷帕霉素靶蛋白复合物1、微管、Ras同源基因家族成员A、自噬、Hela细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81502372

在线出版日期：2020-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：467-471