shRNA稳定干扰Raptor基因表达的小鼠胸腺上皮细胞系的建立

摘要：

目的:建立Raptor基因稳定干扰的小鼠胸腺上皮细胞系(mouse thymic epithelial cell line 1,mTEC1).方法:根据Sigma公司数据库Raptor基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列,在其3′和5′端添加pLKO.1-puro慢病毒载体酶切位点序列,合成shRNA序列,插入载体.将pLKO.1-puro-shRNA-Raptor慢病毒载体与包装质粒混合,共同转染293T细胞,收集病毒颗粒感染mTEC1,再用嘌呤霉素对其进行筛选,最后用免疫印迹法检测Rap-tor,mTOR,磷酸mTOR(p-mTOR)以及mTOR下游分子核糖体S6激酶(ribosomal S6 kinase,p70S6k),磷酸化p70S6k(p-p70S6k)的表达水平.同时采用细胞计数和TUNEL法分别检测细胞增殖与凋亡.结果:合成的Raptor基因shRNA序列成功插入至经AgeⅠ和EcoRⅠ酶切的pLKO.1-puro载体,经测序表明序列正确;免疫印迹结果显示,pLKO.1-puro-shRNA-Raptor感染mTEC1后,Raptor、mTOR及其下游p-p70S6k蛋白表达明显降低,但细胞增殖及凋亡无明显变化.结论:成功构建Raptor shRNA慢病毒表达载体,建立稳定的Raptor基因敲降的小鼠mTEC1.

关键词：shRNA、Raptor、胸腺上皮细胞

所属期刊栏目：29

分类号：R393

资助基金：国家自然科学基金资助项目81671541

在线出版日期：2019-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：108-112