ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定

摘要：

目的:构建酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channels 3,ASIC3)干扰慢病毒质粒并进行效率鉴定.方法:利用GenBank获取ASIC3基因序列并合成相应干扰序列,通过T4 DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko.1-Puro载体,将重组质粒转染293T细胞获取慢病毒,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测病毒滴度;将包装之后的慢病毒感染PC12、BV2、N2a细胞,分别分为ASIC3-shRNA组和EGFP-shRNA组(阴性对照),经慢病毒感染后用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测ASIC3 mRNA和蛋白表达.结果:合成的ASIC3干扰序列成功连接至Pl-ko.1-Puro载体;qRT-PCR及DNA测序鉴定结果证实,ASIC3-shRNA质粒构建成功;qRT-PCR与免疫印迹结果表明,在PC12、BV2、N2a细胞中,与EGFP-shRNA组相比,ASIC3-shRNA组ASIC3 mRNA和蛋白表达量均明显下调(P<0.05).病毒滴度约为1×109 IU/mL.结论:ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒构建成功.

关键词：酸敏感离子通道3、干扰质粒、慢病毒、疼痛

所属期刊栏目：29

分类号：R393

资助基金：镇江社会发展科技支撑项目SH2014078

在线出版日期：2019-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：58-61,66