miR-222-3p通过靶向调节Bim蛋白表达参与肾细胞癌的发生发展

摘要：

目的:检测miR-222-3p在肾细胞癌组织中的表达,探讨其参与肾细胞癌发生发展的分子机制.方法:运用qRT-PCR检测15对肾细胞癌组织和对应癌旁组织miR-222-3p的表达水平.生物信息学预测miR-222-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证其靶向调控作用.运用免疫组化和蛋白质印迹技术检测癌组织中靶基因蛋白表达水平.进一步通过脂质体瞬时转染技术实现肾细胞癌细胞株769-P中miR-222-3p过表达,采用流式细胞术检测miR-222-3p对细胞凋亡的影响.结果:qRT-PCR结果显示,miR-222-3p在肾细胞癌组织的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01).生物信息学预测显示,抗凋亡蛋白Bim是miR-222-3p潜在的靶基因.荧光素酶报告实验证实,过表达miR-222-3p可抑制含有Bim 3'-UTR的荧光素酶报告基因的荧光素酶活性,但对Bim 3'-UTR突变体的荧光素酶活性没有影响.免疫组化结果显示,肾细胞癌组织中Bim蛋白免疫组化阳性反应程度明显低于相应的癌旁组织(P<0.01);蛋白质印迹结果进一步证实Bim蛋白在肾细胞癌组织中的表达较癌旁组织明显下调(P<0.01).进一步在769-P细胞中瞬时过表达miR-222-3p后,发现Bim蛋白水平明显下调(P<0.01),但Bim mRNA水平无明显变化.流式细胞术检测结果显示,过表达miR-222-3p可显著抑制769-P细胞的凋亡(P<0.01).结论:miR-222-3p可通过靶向作用于抑癌基因Bim表达抑制肾癌细胞的凋亡,在肾癌的发生发展中起重要作用,miR-222-3p/Bim轴为肾细胞癌治疗提供新的途径.

关键词：肾细胞癌、miR-222-3p、Bim、凋亡

所属期刊栏目：28

分类号：R737.11(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81472021,81772282;江苏省自然科学基金资助项目BK20140730;生命分析化学国家重点实验室资助项目5431ZZXM1601

在线出版日期：2018-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-11