β-catenin siRNA慢病毒载体的构建及其对A549耐药细胞生长及自噬的影响

摘要：

目的:通过构建β-catenin siRNA慢病毒表达载体,研究Wnt信号通路与顺铂诱导非小细胞肺癌耐药的相关机制.方法:根据β-catenin基因mRNA序列,设计并合成3对shRNA序列,退火形成双链DNA,与慢病毒载体 pLentiLox3.7连接、转化,挑取阳性克隆进行测序鉴定;转染293T 细胞,包装产生慢病毒,检测滴度;感染A549细胞,筛选出有效抑制靶点;将慢病毒感染A549/DDP耐药细胞株24 h后,用不同浓度的顺铂干预48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;根据细胞预先有无慢病毒感染,分为A549组、A549/DDP组、A549/DDP+siRNA组、A549/DDP+siNC组,用8 μg/mL顺铂处理各组细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法测定各组细胞中自噬相关蛋白 LC3Ⅱ及Wnt信号通路关键因子β-catenin表达水平.结果:经DNA测序鉴定,成功构建β-catenin siRNA慢病毒载体,并筛选出有效抑制靶点;相同浓度下顺铂对A549细胞抑制作用明显大于A549/DDP细胞(P<0.05),对A549/DDP+siRNA组细胞的抑制作用也强于A549/DDP细胞;8 μg/mL顺铂干预后,A549/DDP组β-catenin及LC3Ⅱ的表达明显高于A549组(P<0.05),而A549/DDP+ siRNA组β-catenin和LC3Ⅱ表达较A549/DDP组减少.结论:Wnt信号通路参与非小细胞肺癌对顺铂产生的耐药,该过程与细胞产生自噬有关.

关键词：肺癌、Wnt信号通路、耐药、自噬

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分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：镇江市科技计划项目SH2013033;江苏大学附属医院博士启动基金资助项目jdfyRc2015013

在线出版日期：2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：213-218