Betatrophin重组腺病毒过表达载体的构建

摘要：

目的:应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础.方法:根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列,经化学合成得到含BamH Ⅰ/Age Ⅰ酶切位点的小鼠betatrophin基因全长cDNA质粒,将其酶切后插入到带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的GV314载体CMV-MCS-3 FLAG-SV40-EGFP中,得到重组病毒穿梭质粒pGV314-betatrophin;经BamH Ⅰ/Age Ⅰ双酶切后,与线性化的pDC315病毒基因组质粒体外同源重组,构建含有目的基因的腺病毒载体Ad-betatrophin,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,利用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白质印迹法及测序鉴定重组的腺病毒.结果:阳性克隆质粒Ad-betatrophin在HEK293T细胞中成功包装出重组病毒,经PCR、蛋白质印迹及测序检测表明重组腺病毒包装成功.结论:成功构建了携带小鼠betatrophin 基因的复制缺陷型重组腺病毒过表达载体.

关键词：betatrophin、增强型绿色荧光蛋白、同源重组

所属期刊栏目：26

分类号：R393

资助基金：国家自然科学基金资助项目81570721,81370965;江苏省自然科学基金资助项目BK20151331;江苏省卫生厅国际交流支撑计划及面上科技项目H201247;江苏省六大人才高峰项目2015-WSN-006;镇江市卫生科技重点专项项目SHW2015017;镇江市社会发展项目SH2015028,SH2013035,SH2015042

在线出版日期：2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：124-127,131