长链非编码RNA525893重组慢病毒载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖的影响

摘要：

目的:构建含长链非编码RNA525893(lnc525893)的重组慢病毒载体,观察其对宫颈癌细胞增殖的影响.方法:以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为模板扩增出lnc525893基因片段,并将其插入至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP中,构建重组质粒pCDH-lnc525893.将重组质粒pCDH-lnc525893、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染人胚肾上皮细胞(293 T细胞),包装含有lnc525893的重组慢病毒,采用梯度稀释法测定病毒滴度.将重组慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞,通过实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测HeLa细胞中1nc525893的表达;采用细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测过表达lnc525893对HeLa细胞增殖的影响.结果:质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pCDH-lnc525893构建成功.梯度稀释法测得重组慢病毒滴度约为1×107 pfu/mL.重组慢病毒感染HeLa细胞后,qRT-PCR结果显示细胞中lnc525893表达显著升高;CCK-8结果表明,高表达lnc525893可以抑制HeLa细胞的增殖.结论:成功构建含lnc525893的重组慢病毒载体,该长链非编码RNA能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖.

关键词：长链非编码RNA、HeLa细胞、慢病毒载体、增殖

所属期刊栏目：26

分类号：R393;R737.33

资助基金：国家自然科学基金资助项目81572556

在线出版日期：2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：93-97