小鼠microRNA-31反转录病毒载体重组质粒的构建及鉴定

摘要：

目的:以pMSCV-puro载体(MGP)为骨架,构建带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠microRNA-31(miR-31)反转录病毒载体MGP-31.方法:PCR扩增带有NotⅠ以及XhoⅠ酶切位点的miR31的前体(premiR-31)序列,然后克隆至MGP载体上,测序鉴定.将构建的MGP-31质粒转染HEK-293T细胞,通过荧光显微镜观察GFP的表达情况,实时定量PCR检测miR-31转录水平以评估MGP-31质粒的转染效率.结果:基因序列分析显示pre-miR-31基因序列正确,并成功插入MGP载体,转染HEK-293T细胞可表达GFP,实时定量PCR结果表明转染MGP-31质粒的HEK-293T细胞可高表达miR-31.结论:MGP-31反转录病毒载体构建成功.

关键词：microRNA-31、反转录病毒载体、重组质粒

所属期刊栏目：26

分类号：R393

资助基金：国家自然科学基金资助项目31400773;江苏省高校自然科学基金资助项目14KJB320001;江苏省高等学校大学生创新创业训练计划项目3121502020

在线出版日期：2016-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：26-30