弓形虫表面抗原1、棒状体蛋白18真核表达载体的构建与体外表达

摘要：

目的：构建刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）表面抗原1（surface antigen 1，SAG1）及棒状体蛋白18（rhoptry protein 18，ROP18）的真核表达重组质粒，并在真核细胞中表达目的蛋白。方法：设计 SAG1、ROP18的特异引物，采用 RCR 技术从弓形虫 RH 株基因组 DNA 中扩增编码 SAG1、ROP18基因片段，经克隆至 pTG19-T 载体后，亚克隆至真核表达载体 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24，构建真核表达重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18。将构建好的真核表达重组质粒转染人肾上皮细胞系293-T 细胞，分析转染细胞的表达情况。结果：PCR 扩增弓形虫 SAG1和 ROP18基因片段分别为1011 bp 和1665 bp，与预期大小相符。重组质粒经 PCR、酶切和测序鉴定结果均正确，通过 RT-PCR 和蛋白质印迹技术鉴定出重组质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3× FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18在293-T 细胞中表达。结论：成功构建了真核表达质粒 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-SAG1和 p3×FLAG-Myc-CMVTM-24-ROP18，该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白。

关键词：刚地弓形虫、SAG1、ROP18、真核表达质粒

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81301453；卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题WSBKTKT201302；中国博士后科学基金资助项目2014M561598；江苏省博士后科研资助计划项目1402171 C；江苏大学高级人才启动基金资助项目13JDG023，13JDG127

在线出版日期：2015-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：246-250,255