Toll 样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制

摘要：

目的：探索 Toll 样受体（Toll like receptor，TLR）-4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。方法：Percoll 密度梯度离心法分离原代大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-SCs），流式细胞术鉴定细胞表面标志物 CD34、CD44、CD54、CD90。用 Transwell 小室建立干细胞（上室）成骨细胞（下室）共培养体系，在此体系下对 BMSCs 进行破骨细胞诱导培养。将共培养体系分为 TLR-4激活组和空白组，前者以TLR-4激动剂 LPS（10 ng／mL）激活，后者加入等体积 PBS。在诱导培养第6天，对上室细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）染色，计数并比较各组破骨细胞数。同时，蛋白质印迹检测各组下室细胞悬液中核因子κB 受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）的蛋白表达，观察电泳条带并行定量分析。结果：密度离心法获得原代大鼠 BMSCs，流式细胞分析检测显示 CD34阴性、CD44、CD54和 CD90阳性。TRAP 染色阳性细胞为破骨细胞，细胞计数显示，TLR-4激活组破骨细胞数明显多于空白组（t ＝13．556，P ＜0．05）。蛋白质印迹结果显示，TLR-4激活组 RANKL 的表达明显多于空白组（t ＝17．630，P ＜0．05）。结论：在成骨细胞共培养体系下，激活 TLR-4能够促进 BMSCs 向破骨细胞分化，其机制可能与 TLR-4促进成骨细胞分泌 RANKL有关。

关键词：干细胞、Toll样受体-4、破骨细胞、核因子κB受体活化因子配体

分类号：R329.2(人体形态学)

在线出版日期：2015-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：221-224,228