幽门螺杆菌CagL蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori CagL蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并鉴定其特性.方法:用原核表达并纯化的CagL融合蛋白免疫BALB/c小鼠,6周后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经亚克隆筛选获得阳性杂交瘤细胞株；ELISA法鉴定mAb的亚型；间接ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清和腹腔积液效价及其相对亲和力；相加ELISA法分析mAb的识别表位；蛋白质印迹法鉴定mAb特异性；冻溶法检测杂交瘤细胞株的稳定性.结果:获得3株能稳定分泌抗CagL的杂交瘤细胞株,其中两株单抗属IgM类,一株单抗属IgG2a类,轻链型别均为κ型；杂交瘤细胞培养上清效价在1∶64～1∶128之间,腹腔积液的效价均达1∶16000以上；相对亲和力较高；3株mAb识别3种不同的抗原表位；3株mAb都能与融合蛋白反应,其中两株能与H.pylori全菌蛋白发生特异性反应；杂交瘤细胞经冻存复苏后,体外传代仍能稳定分泌mAb.结论:成功制备了抗H.pylori CagL蛋白的单克隆抗体,为深入研究幽门螺杆菌CagL蛋白的功能和Ⅳ型分泌系统的致病机制奠定了基础.

关键词：CagL、幽门螺杆菌、单克隆抗体、杂交瘤

所属期刊栏目：23

分类号：R392-33;R378-99

资助基金：国家自然科学基金资助项目81271795;江苏省省级科技创新与成果转化专项基金资助项目BL2012047;高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20123227110008

在线出版日期：2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：238-242