快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立

摘要：

目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65 ℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定.利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性.用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性.结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增.LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml.LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min.结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法.

关键词：环介导等温扩增、单核细胞增生李斯特菌、溶血素基因

所属期刊栏目：22

分类号：R331(人体生理学)

在线出版日期：2013-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：394-397