胞质定位和核定位突触核蛋白慢病毒表达载体的构建

摘要：

目的:构建表达人突触核蛋白(α-synuclein)核定位和胞质定位基因(SNCA-NLS和SNCA-NES)的真核细胞表达慢病毒载体,并且观察重组质粒在293FT细胞中的表达情况.方法:采用PCR 方法从质粒中扩增出目的基因,扩增出的目的基因与线性化后的载体PLVU-2A-EGFP在In-fusion重组酶作用下通过同源重组把目的片段连接到空载体上.目的片段和EGFP报告基因之间通过自剪切多肽2A 连接.对重组质粒进行PCR、双酶切和质粒测序鉴定后,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000 将重组的质粒转染至293FT细胞中,用荧光显微镜检测基因在细胞中表达的情况.通过蛋白质印迹分析核定位和胞质定位基因(SNCA-NLS和SNCA-NES)在胞核和胞质中突触核蛋白的定向表达.结果:PCR、双酶切和质粒测序结果证明SNCA-NLS和SNCA-NES已正确地克隆到真核表达载体PLVU-2A-EGFP中,并分别在细胞核和细胞质中定向表达.结论:成功构建了PLVU-SNCA-NLS-2A-EGFP及PLVU-SNCA-NES-2A-EGFP表达载体,为研究α-突触核蛋白在帕金森病发病过程中所起的作用奠定了基础.

关键词：人突触核蛋白、载体构建、慢病毒载体

所属期刊栏目：21

分类号：R741(神经病学与精神病学)

资助基金：江苏省自然科学基金资助项目BK2008249;江苏省六大人才高峰基金资助项目2007038

在线出版日期：2011-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：139-142,146,封3