幽门螺杆菌外膜蛋白cagL基因的克隆、表达及其对IL-8 mRNA表达的影响

摘要：

目的:克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)NCTC11637菌株cagL基因,并探讨其对IL-8 mRNA表达的影响.方法:设计cagL引物,应用PCR扩增目的基因片段,TA克隆后测序分析, 用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体cagL-PET28a(+)转化E.coli BL-21(DE3),IPTG诱导表达, 镍亲和层析纯化,SDS- PAGE及蛋白质印迹鉴定表达蛋白.纯化蛋白与细胞GES-1共培养,提取细胞总RNA,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达.结果:测序分析表明cagL编码成熟肽的碱基序列为654 bp,编码217个氨基酸,与基因库公布的其他H.pylori菌株的基因序列同源性为96%～98%,氨基酸同源性为 97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域;表达蛋白的相对分子质量约为32 000,蛋白质印迹检测融合蛋白具有良好的抗原活性;重组蛋白作用于GES-1细胞后,可诱导细胞因子 IL-8 在 mRNA 水平上的表达.结论:CagL蛋白可刺激GES-1细胞IL-8 mRNA的表达.

关键词：幽门螺杆菌、原核表达、白细胞介素-8

所属期刊栏目：20

分类号：R378.99(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30870096;江苏省高校自然科学基金资助项目08KJB3120001

在线出版日期：2010-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：194-198