hHGF腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达

摘要：

目的:构建人重组肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSCs),为转基因治疗提供实验基础.方法:设计含有SalⅠ及XbaⅠ酶切位点的引物,PCR扩增hHGF,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的pAdTrack-CMV穿梭质粒上.重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,筛选获得含有hHGF的重组腺病毒质粒,PCR、酶切鉴定并测序.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,经3轮扩增,制备高效表达的AdGFP/HGF,并转染hucMSCs.结果:重组腺病毒质粒经PCR和SalⅠ,XbaⅠ酶切鉴定,证实含有HGF基因,测序结果和设计片段的序列一致.荧光显微镜下发现293A细胞发光率几乎为100%,感染的hucMSCs亦可表达绿色荧光蛋白.结论:成功构建了hHGF腺病毒表达载体,并获得高滴度的病毒, 能高效感染hucMSCs,为后续研究奠定了基础.

关键词：肝细胞生长因子、人脐带间质干细胞、腺病毒载体

所属期刊栏目：20

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30840053;江苏省医学领军人才项目LJ200614;江苏省自然科学基金资助项目BK2007092;江苏大学科技创新团队和拔尖人才项目2008-018-02;江苏大学大学生科研项目07A131

在线出版日期：2010-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：190-193,后插1