天然型EGFP在无细胞翻译系统中的可溶表达

摘要：

目的:构建能在无细胞翻译系统中表达天然型增强绿色荧光蛋白(EGFP)的原核表达载体.方法:以质粒pEGFP-N1为模板扩增EGFP基因,NcoI和HindⅢ双酶切EGFP基因和pET28a载体.T4 DNA连接酶连接,转化E.coli DH5α,提取载体,酶切和DNA测序鉴定.正确重组的载体命名为pET28a-EGFP.在无细胞翻译系统中加入大抽后的pET28a-EGFP模板(0.6 mg/ml),孵育3 h.荧光显微镜观察荧光.Western blot鉴定EGFP.结果:测序证实重组EGFP基因序列与基因库中的序列完全一致,荧光显微镜下观察到无细胞翻译系统中强烈荧光,Western blot证实分子量约为27 kD的EGFP高效表达.结论:成功构建了能在无细胞翻译系统中高效表达可溶性天然型EGFP的pET28a-EGFP载体,为进一步建立荧光强度标准物奠定了基础.

关键词：增强绿色荧光蛋白(EGFP)、重组载体、无细胞翻译系统、原核表达

所属期刊栏目：17

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：225-227,231