人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定

摘要：

目的:研究反义封闭ppGalNAc-T2基因表达对胃癌细胞GC7901细胞增殖以及肿瘤细胞生物学行为的影响,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901.方法:在对几种肿瘤细胞的ppGalNAc-T2基因的表达水平分析后,以高表达ppGalNAc-T2的人胃癌细胞GC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度ppGalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体并转染胃癌细胞GC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞GC7901细胞pp-GalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过荧光显微镜、RT-PCR技术手段检测封闭反义ppGalNAc-T2基因RNA表达.结果:ppGalNAc-T2反义表达质粒载体pEGFP-FDT2和pEGFP-FXT2经限制性酶切及部分序列分析证明基因已正确插入载体中,荧光显微镜及RT-PCR显示转染成功.结论:成功构建了ppGalNAc-T2反义表达质粒载体,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞GC7901ppGalNAc-T2的含量明显降低,为进一步研究ppGalNAc-T2奠定了基础.

关键词：多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶、O-糖基化、GC7901细胞、RT-PCR、pEGFP-C1质粒

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分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：江苏省高校自然科学基金04kjb320129;苏州大学校科研和教改项目2003007

在线出版日期：2005-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：100-103,106