含脂氧素A4受体同源基因真核表达载体的构建与转染系膜细胞

摘要：

目的:构建小鼠脂氧素A4受体同源基因(LRHG)的真核表达载体,克隆后转染小鼠肾小球系膜细胞,观察LRHG编码的脂氧素A4受体样蛋白(LRLP)在系膜细胞中的表达.方法:应用PCR方法,以小鼠睾丸cDNA为模板,扩增出LRHG基因片段,插入质粒pGEM-T中,转化入大肠杆菌JM109.扩增阳性重组质粒,经酶切后纯化并测序鉴定目的片段.构建含6×组氨酸(His)基因的真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,转化入大肠杆菌JM109扩增,酶切后再测序鉴定目的片段,抽提质粒后转染系膜细胞,进行Western blot鉴定LRLP的表达.结果:测序鉴定表明,克隆的LRHG序列与GenBank中LRHG原序列100%符合,应用抗6×His抗体进行Western blot鉴定系膜细胞中有LR-LP的表达.结论:成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,并转染了肾小球系膜细胞,获得了稳定的表达.

关键词：脂氧素A4受体同源基因、真核表达载体、克隆、转染、系膜细胞

所属期刊栏目：15

分类号：Q782;R392.11(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省卫生厅"135工程"医学重点人才基金2002-45

在线出版日期：2005-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：93-96