人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析

摘要：

目的:应用生物工程方法研制人巨细胞病毒包膜蛋白pp65,并行相应抗体制备的探讨性研究.方法:利用DNA重组技术,以HCMV AD169病毒株基因组为模板,通过PCR克隆HCMV pp65基因.以pET32a(+)为表达载体,构建重组质粒,并在E.Coli (DE3-plys)中诱导表达.然后经柱层析获得纯化蛋白,由蛋白质印迹法验证蛋白的特异性.最后,免疫小鼠获取抗血清,检测抗体产生的效价.结果:重组质粒经测序与Genebank序列一致,转染的细菌能高效表达目的蛋白,纯化后的蛋白能与已知单克隆抗体结合,免疫后的小鼠抗血清能同时识别重组蛋白和病毒抗原.结论:重组表达的HCMV pp65全蛋白经纯化获得较高纯度,且保留良好的免疫原特性.为HCMV感染诊断用单克隆抗体的研制奠定了基础,并为HCMV感染的免疫诊断和治疗提供了新的研究方向.

关键词：人巨细胞病毒、pp65、表达纯化、蛋白质印迹法、ELISA

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分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：上海市教委资助项目04BA04

在线出版日期：2005-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：479-481,484