枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶的克隆和表达

摘要：

目的:运用分子生物学手段获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因.方法:根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因序列设计引物,通过PCR获得该基因并与源序列进行比较分析,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,并在全自动生化分析仪上用速率法测定其活性.结果:克隆到的葡萄糖脱氢酶基因与源基因的同源性为99%,克隆到的GDH编码的氨基酸序列167位左右存在突变:EVI(GAAGTGATT)→AF(GCGTTT),利用酶的初提液测定的葡萄糖脱氢酶活力为75 U/L,比活性为10 U/mg.结论:运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,与表达载体连接后的重组体经大肠杆菌初步表达有活力,经诱导有望获得高产量的葡萄糖脱氢酶,从而为临床服务.

关键词：枯草芽孢杆菌、葡萄糖脱氢酶、克隆、表达

所属期刊栏目：14

分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：江苏大学校科研和教改项目02JDQ030

在线出版日期：2004-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：7-10