微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶的定位及活性检测

摘要：

本研究以微小隐孢子虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Cryptosporidium parvum glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,CpGAPDH)为对象,研究其亚细胞定位和酶动力学特征.设计特异性抗原多肽并免疫家兔,获得多克隆抗体,利用亲和纯化法获特异性抗体;经Western blot方法验证该抗体特异性,再通过间接免疫荧光法(IFA)进行蛋白定位.通过原核表达获得GST重组蛋白(GST-CpGAPDH),基于GAPDH的酶促反应利用辅酶NAD(H)或NADP(H)为电子受体或供体的原理,通过吸光度比色法监测反应中NAD(H)/NADP(H)的增加或减少鉴定其酶活性.结果显示,成功获得并纯化抗 CpGAPDH 抗体;Western blot分析显示该抗体可识别条带大小为 40 kDa;IFA结果表明该蛋白主要分布于子孢子胞浆内,部分呈现颗粒状.利用重组蛋白确定了CpGAPDH的酶活性;在两种辅酶中,CpGAPDH更倾向于使用NAD(H)进行酶活反应.结果表明,本研究确定了CpGAPDH在虫体细胞的定位及酶活性检测,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.

关键词：微小隐孢子虫、糖酵解途径、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、酶活动力学、蛋白定位

所属期刊栏目：30

分类号：Q95;R392.11;R725.6

在线出版日期：2023-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：137-142