旋毛虫副肌球蛋白在BaculoDirect昆虫杆状病 毒表达系统中的表达及鉴定

摘要：

利用BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统表达重组旋毛虫副肌球蛋白(recombinant Trichinella spiralis paramyosin,rTsPmy),以获得生物学活性较好的重组蛋白.通过PCR和DNA重组方法构建含TsPmy基因的Gateway入门载体重组质粒pDONR221(pDONR221/TsPmy),经测序鉴定后,扩增重组质粒;利用重组质粒pDONR221/TsPmy和BaculoDirect线性杆状病毒进行Gateway DNA重组反应,构建重组病毒,用其直接感染昆虫细胞Sf9使得重组病毒具有感染活力;连续感染Sf9以扩增病毒,利用滴度较高的病毒感染Sf9进行rTsPmy表达;SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定表达的重组蛋白rTsPmy.结果显示,重组质粒经测序鉴定显示序列正确;SDS-PAGE及Western blotting显示rTsPmy分子量大小约110 kDa,未见不完全表达;可溶性分析显示rTsPmy部分可溶,大部分为不可溶沉淀;Western blotting结果显示rTsPmy可被旋毛虫感染的小鼠和猪抗血清识别,具有抗原特异性.本研究首次利用BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统成功表达了rTsPmy,获得翻译后修饰更加完善、 纯化效果更好的重组蛋白,对于进一步研究TsPmy的功能,为制备有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子提供了生物学基础.

关键词：旋毛虫、副肌球蛋白、昆虫杆状病毒表达系统、表达和鉴定、抗原性

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资助基金：北京市自然科学基金项目7162017;国家自然科学基金项目8167080246

在线出版日期：2018-08-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

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