埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备

摘要：

埃及伊蚊serpin23 (丝氨酸蛋白抑制剂23) 在雌蚊唾液腺特异高表达,是蚊虫唾液组分的主要蛋白之一.本文设计特异性引物序列,采用RT-PCR技术扩增获得埃及伊蚊广东电白株serpin23成熟肽序列,构建重组表达质粒pET-28a ( +) -serpin23并测序验证.经IPTG诱导表达、KCl染色、切胶纯化获取了目的蛋白;制备了小鼠特异性抗serpin23蛋白多克隆抗体.结果显示:获得serpin23成熟肽序列,全长1197 bp,编码399个氨基酸.等电点pI为6.13,具有serpin结构域和一个功能未知的FAINT结构域.pET-28a ( +) -serpin23重组质粒可表达了大小约为47 kDa、以包涵体表达为主的融合蛋白.Western Blot结果证明serpin23重组蛋白可以与抗-His标签和抗-serpin23抗体发生免疫反应,约47 kDa处产生特异性条带.本研究成功获得了埃及伊蚊广东电白株serpin23重组表达蛋白和抗serpin23多克隆抗体,为后续功能研究奠定基础.

关键词：埃及伊蚊、丝氨酸蛋白抑制剂、克隆表达、Western Blot

所属期刊栏目：24

资助基金：国家自然科学基金项目81260260,81060318;贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金黔科合人字201316号;贵州省科技厅基础平台建设黔科平台20124006号

在线出版日期：2018-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：230-235