基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析技术的初步研究

摘要：

为建立基于纳米抗体的检测日本血吸虫感染的胶体金免疫层析技术,将已经通过噬菌体文库筛选得到的两株纳米抗体的质粒,在枯草芽孢杆菌中表达,得到具有活性的抗体蛋白 (VHH-48、VHH-52) 并以NI-NTA亲合层析纯化.以柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记VHH-48和VHH-52抗体蛋白并制备金标垫,分别用日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA) 和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,确定抗体蛋白的最佳标记pH和最适蛋白浓度.采用抗体双夹心的方法对两株抗体蛋白进行组合,建立胶体金免疫层析方法.以优化的双夹心抗体组合,组装试纸条,进行了灵敏度的测定和血吸虫病人粪检阳性血清的敏感性评估,以并殖吸虫等其他寄生虫感染的血清测定了试纸条的特异性.结果显示,成功表达并获得了纯度较高的纳米抗体.胶体金标记VHH-48和VHH-52抗体的最适蛋白量为14和10 μg/mL,最适pH分别需要加入16和12 μL体积的0.2 mol/L K2CO3,并确定以VHH-52标金和VHH52划线为最佳的抗体双夹心组合.对可溶性虫卵抗原的最低检测量为3.4 ng/mL,检测血吸虫病人阳性血清的检出率为2.27%,检测其他寄生虫感染血清结果显示出良好的特异性.本文构建了基于日本血吸虫SEA纳米抗体的胶体金免疫层析试纸条方法,为纳米抗体在血吸虫病快速诊断的应用奠定了一定基础.

关键词：日本血吸虫、虫卵抗原、纳米抗体、胶体金免疫层析方法

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资助基金：省部共建项目WKJ-ZJ-1405;浙江省科技计划项目2017F30002;浙江省科技计划项目2015F50066

在线出版日期：2018-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：205-211