白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库的构建

摘要：

目的:构建白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库.方法:抽提、纯化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫总RNA,进行反转录合成第1链cDNA;用C1ontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒进行长距离PCR,合成全长双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K消化、提纯后,进行Sfi I酶切;用Chroma Spin-400柱将酶切产物进行分级分离,然后经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收400bp以上的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌体,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果:经检测,未扩增文库滴度达2.0×107pfu/mL,重组效率在10-4稀释度时每块平板约210～255个噬菌斑中均未发现任何蓝色噬斑,扩增文库滴度达1.75×109pfu/mL;用载体克隆位点两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:所选9个噬菌体中均含有重组的cDNA,并且均在500bp以上,其中1kb以上的有2个、700bp的有5个、500bp的有2个.结论:已成功地获得一高质量的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株4龄幼虫cDNA文库.

关键词：白纹伊蚊、杀虫剂抗性、cDNA文库

所属期刊栏目：8

分类号：R38(医学寄生虫学)

资助基金：广东省自然科学基金970092;国家"211"工程建设项目98124

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：92-98