正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用

摘要：

目的为了探讨β1,4半乳糖基转移酶-Ⅱ和Ⅴ(β1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-Ⅱ and Ⅴ)表达定位,本实验通过分子生物学手段,制备正、反义β-1,4-GalT-Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针.方法设计引物,提取小鼠脑总RNA,通过RT-PCR方法,得到β-1,4-GalT-Ⅱ和Ⅴ基因序列,将其克隆到pGEM-T载体.根据其多克隆酶切位点和Sp6及T7位置,分别酶切后作为转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,得到正、反义β-1,4-GalT-Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针.检测标记探针的效价后,最后通过原位杂交分析标记探针的特异性和杂交效果.结果本实验得到了高效价的正、反义β-1,4-GalT-Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针,并表现出很好的杂交效果.结论正、反义β-1,4-GalT-Ⅱ和Ⅴ RNA原位杂交探针的制备,为进一步研究β-1,4-GalT-Ⅱ和Ⅴ在组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础.

关键词：β1、4半乳糖基转移酶-Ⅱ和Ⅴ、RNA探针、原位杂交、荧光定量、小鼠

所属期刊栏目：25

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：江苏省重点实验室基金JSK02012;江苏省高校自然科学基金03KJB180109

在线出版日期：2004-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：273-276